ASPE 技术概述

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等位基因特异性引物延长（Allele Specific Primer Extension，ASPE）是一种基于溶液的序列特异性酶促反映技术，可在单个反映管中同时检测多个 SNP。ASPE 步骤蕴含两个阶段：首先通过酶促反映确定指标基因型，随后在固相微球表表进行捕获以实现检测。借助溶液相动力学优势，该技术可利用序列象征的微球来检测新模板，具体实现方式是在等位基因特异性寡核苷酸上衔接适当的捕获序列。

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可使用 AlleleID? 软件设计用于菌株分辨和 ASPE xMAP? 检测的规划。

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等位基因特异性引物设计指南

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1. ASPE 引物应来自统一 DNA 链（针对每个指标序列），并为所有序列变体合成相应引物。

2. 建议退火温度（Ta opt）应在 51–56°C 领域内。

3. SNP 位点应位于等位基因特异性引物的 3' 结尾，以确保正确的杂交。

4. 捕获序列（TAG 序列）应位于引物的 5' 结尾。

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ASPE 反映的模板为扩增后的 PCR 片段。天生该片段时不必要对引物进行象征。在等位基因特异性引物延长步骤中，聚合酶通过掺入生物素象征的 dNTP 来延长引物。只有当等位基因特异性引物的 3' 结尾与同源等位基因序列结应时，才会产生延长。

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该 SNP 基因分型检测的反映前提取决于衔接在荧光微球上的抗 TAG 序列。微球内部象征有荧光染料，并与抗 TAG 序列偶联。

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等位基因特异性寡核苷酸的设计可参照本文概述的检测设计指南，或使用 PrimerPlex 软件工具——该工具专为基于 xMAP 系统的多沉分析设计 ASPE 检测而开发。

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